Главная  /  Приборы для лаборатории ветсанэкспертизы  /  Экспресс тесты на определение антибиотиков в молоке  /  Тест Калидос МР для определения антибиотиков, сульфаниламидов и ингибирующих веществ в молоке

Экспресс тесты на определение антибиотиков в молоке

« Назад

Тест Калидос МР для определения антибиотиков, сульфаниламидов и ингибирующих веществ в молоке  29.12.2015 19:06

Тест «Калидос МР» внесен в ГОСТ Р 51600-2010 «Молоко и молочные продукты. Микробиологические методы определения наличия антибиотиков».

   Микробиологический тест «Калидос МР» применяется для анализа коровьего, овечьего и козьего молока сырого, пастеризованного или восстановленного.

Тест основан на принципе размножения термофильных стрептококков (Bacillus Stearothervophilus подвида Calidolctis) в агаровой среде при отсутствии ингибирующих веществ, угнетающих рост бактерий.

Отсутствие веществ угнетения роста микроорганизмов в образце молока определяется изменением цвета pH- индикатора, а наличие их в  концентрации, превышающей допустимый уровень, наоборот , оставляет цвет прежним.

Чувствительность:

Пенициллин G - 0,002 мкг/г; Тетрациклин – 0,1 мкг/г;

 Комплектация набора:

-      ампулы   с   агаровой   средой   собранные   в   микропластины, готовые к использованию – 100 шт. (4х25);

пипетки объемом 100 мкл -100 шт.

   Преимущества «Калидос»:

 

  • Не требует пробоподготовкиБолее высокая, по сравнению с аналогами, чувствительность к антибиотикам, сульфаниламидам и моющим средствам
    • Легкая визуальная интерпретация результатов
    • Одноразовые пипетки, позволяющие легко и точно дозировать исследуемые пробы молока
  • Питательные среды, расфасованные непосредственно в пробирки для анализа не требуют обогащения

Тест «Калидос»

предназначендля определения остаточного количества антибиотиков, сульфаниламидов и ингибирующих веществ в молоке. Применяется для анализа коровьего, овечьего и козьего молока.

  1.      НАЗНАЧЕНИЕ

Неправильное использование антибиотиков в скотоводстве и в производстве кормов может привести к их накоплению в биологических жидкостях и тканях животных. Существуют опасения связанные с потенциальным канцерогенным и генно- токсическим эффектом антибиотиков на организм человека, а также возникновением устойчивой резистентности микроорганизмов к антибиотикам из-за потребления человека пищи, контаминированной этими опасными загрязнителями. Поэтому такие лекарства запрещены для использования в выращивании сельскохозяйственных животных в странах Евросоюза, или же уровень таких лекарств жестко регулируется.

Существуют экспресс - тесты предназначенные для выявления опасных контаминантов в продуктах питания. Тест для сырого молока Kalidos (Калидос) имеет высокую чувствительность к широкому спектру антимикробных препаратов, включая антибиотики бета- лактамной, тетрациклиновой и сульфонамидной и др.групп. Принцип его действия основан на ферментации сахара (глюкозы) бактерией bacillus stearothermophilus calidolactis в присутствии индикатора, меняющего свою окраску с фиолетового на желтый.

Время, затрачиваемое на анализ – от 2 часов 30 минут до 3 часов.

 2.      ПРИНЦИП ТЕСТА

Тест Калидос оснащен ампулами, собранными в микропластины, в которых содержится среда агара. Среда агара культивированная спорами bacillus  stearothermophilus  calidolactis содержит глюкозу и рН- нидикатор бромокрезоловый пурпурный. Тест готов к использованию и не требует предварительной активации и дополнительных реагентов. Для проведения теста нужно всего лишь нанести образец тестируемого молока на поверхность агара и инкубировать тест в течении 2 часов 30 минут до 3 часов в водяной бане, или сухом термостате при температуре 65Со (требуется предварительное термостатирование козьего, овечьего молока). При отсутствии или при незначительном содержании в образце антимикробных субстанций, бактерии начинают развиваться и в процессе роста метаболизируют сахар, превращая его в кислоту. Образовавшаяся кислота меняет цвет индикатора бромокрезолового пурпурного с фиолетового на насыщенный желтый цвет. В присутствии антимикробных субстанций в молоке, развитие спор бактерий ингибируются. В этом случае не произойдет ферментации глюкозы и она не превратиться в кислоту, в результате индикатор среды не поменяет своей первоначальной окраски.

 3.      КОМПОНЕНТЫ ТЕСТ-НАБОРА

-    ампулы, собранные в микропластины, готовые к использованию (4х100);

-    пипетки объемом 100 мкл -100 шт.;

 4.          УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ

Хранить при 4-8 Со (хранение при температуре ниже +4Со - недопустимо); Не использовать тесты, в которых изменилась окраска среды в лунках.

 5.        ДОПОЛНИТЕЛЬНОЕ ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ НЕВКЛЮЧЕННЫЕ В НАБОР

 -  водяная баня с крышкой, с поддержанием температуры 65+- 2С;

-  термостатический блок (термостат) (код EMK 20AGA, Euroclone)

-  дозаторы на 100 мкл со стерильными наконечниками.

 6.      ПРОБОПОДГОТОВКА

Пробоподготовка молока не требуется. Образцы для исследования: сырое молоко, молоко, подвергнутое тепловой обработке, восстановленное сухое молоко. Сырое молоко должно быть протестировано сразу после доения и сбора.

Для анализа может быть использовано козье и овечье молоко.

 7.      ПОРЯДОКРАБОТЫ

  1. Перед проведением анализа доведите температуру исследуемых образцов и ампул теста до комнатной температуры. Нагрейте воду в водной бане до 65Со , достаньте из пакета микропластину о отрежьте от неѐ требуемое количество ампул, снимите с них защитное покрытие из фольги. Оставшиеся ампулы уберите обратно в холодильник.
  2. При каждом анализе используйте один или более отрицательных контролей (образцы молока свободные от антибиотиков).
    1. При помощи пипетки (дозатора) со стерильными одноразовыми наконечниками, внесите в каждую лунку по 100 мкл образца молока. В целях предотвращения перекрестной контаминации всегда меняйте наконечник дозатора перед забором нового образца. Аккуратно покройте лунки клейкой лентой, или другим гидроизолирующим покрытием.

Установите планшет с лунками на водяной бане, или сухом термостате и инкубируйте в течении 2 часов 30 минут до 3 часов при 65С.

Примечание:температураинкубацииявляетсяважнымфактором,влияющимна результат тестирования, поэтому температура водяной бани во время инкубации должна поддерживаться на точно установленном уровне.

 8.      ИНТЕРПРИТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТА

После инкубации, извлеките планшет с лунками из инкубатора и охладите его в течение 1-2 мин при комнатной температуре, предварительно удалив клейкую ленту. Слегка постучите лунки об фильтровальную бумагу для удаления капель воды. Оцените изменение первоначальной окраски среды в лунках.

-   Негативныйобразеци негативный контроль: образцы без антибиотиков и образец с отрицательным контролем - среда в лунках изменила цвет с фиолетового на желтый.

-  Позитивный образец: образец с антибиотиком - цвет среды не изменился.

Если по истечении 3 часов инкубации, лунки с негативным контролем не изменили исходной окраски на ярко- желтый цвет, проверьте температуру инкубатора и продлите процесс инкубации еще на 15 мин. В течение дополнительного времени инкубации проверяйте окраску лунок каждые 5 мин. Пробы, получившие всевозможные комбинации оттенков фиолетового или желтого, будут относиться к сомнительным результатам и должны быть перепроверены другими методами анализа.. Такое может произойти, в случае, когда в образце содержались антибиотики в количестве, не превышающем порог чувствительности теста.

Например, положительный образец можно дополнительно протестировать на наличие пенициллинов. Для этого в данный образец вносят известное количество пенициллина и затем тестируют методом микробиологического анализа. Если пенициллин присутствовал, но позже был ликвидирован пеннициллиназой, в таком случае образец нужно считать отрицательным.

 9.      ПРЕДЕЛЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ*В КОРОВЬЕМ МОЛОКЕ (* Предел чувствительности соответствует минимальному количеству антибиотика в пробе, которое способно ингибировать рост бактерий в условиях анализа.)

Наименованиеантибиотика

Наименьший предел опрделенияЕд/г (мкг/г)

Амоксицилин

0,003

Ампицилин

0,003

Бацитрацин

1,5

Бензилпеницилин

-

Гентамицин

0,025

Данофлоксацин

0,8

Дапсон

-

Доксициклин

-

Дигидрострептомицин

0,2

Диклоксациллин

0,01

Канамицин

0,15

Клоксацилин

0,015

Линкомицин

-

Марофлоксацин

0,8

Мономицин

-

Нафциллин

0,005

Неомицин

0,05

Оксацилилин

0,01

Окситетрациклин

0,1

Олеандомицин

-

ПеницилинG

0,002

Пиперацилин

-

Рифамицин

-

Рифампицин

0,1

Спирамицин

0,6

Спектиномици

0,2

Стрептомицин

0,4

Сульфадиазин

0,025

Сульфадиметоксин

0,025

Сульфакиноксалин

0,025

Сульфамеразин

0,025

Сульфаметазин

0,1

Сульфаметоксазол

0,025

Сульфаметоксипиридазин

-

Сульфатиазол

-

Тетрациклин

0,1

Тилозин

0,04

Триметоприн

0,1

Хорамфеникол(левомицитин)

2,5

Хлортетрациклин

0,1

Цефазолин

-

Цефалексин

-

Цефалониум

-

Цефаперин

-

Цефацетрил

-

Цефкином

-

Цефтиофур

-

Цефуроксим

-

Эритромицин

0,1